溴化氫活化凝膠是一種重要的生物化學試劑,在蛋白質、多肽、核酸等生物分子的偶聯與純化中具有廣泛應用。
以下是對其的詳細介紹:
一、基本原理與特點
溴化氫活化凝膠通常采用瓊脂糖凝膠作為基質,通過溴化氫處理引入氰酸酯基團,使其具備與含氨基生物分子偶聯的能力。
其核心特點包括:
1.反應條件溫和:偶聯反應在pH 8-10、溫度4-25℃的條件下進行,可有效保護生物分子的活性。
2.偶聯效率高:活化基團與氨基的反應速度快,結合能力強,適用于蛋白質、多肽、核酸等生物分子的固定化。
3.適用范圍廣:可結合帶氨基的物質(如多糖、蛋白、核酸、抗體等),在生物醫藥純化工藝中具有廣泛應用。
二、產品規格與性能
市場上常見的溴化氫活化凝膠產品具有以下規格與性能參數:
1.基質:高度交聯的瓊脂糖凝膠
2.粒徑范圍:45-165μm
3.偶聯量:10-18mg BSA/ml(以牛血清白蛋白為標準)
4.流速:75-700cm/h(不同產品型號有所差異)
5.保存條件:4-8℃干燥避光保存
三、應用領域
溴化氫活化凝膠在以下領域具有重要應用:
1.蛋白質純化:用于固定化配體,制備親和層析介質,實現蛋白質的高效分離與純化。
2.多肽與核酸固定:可偶聯多肽、核酸等生物分子,用于生物傳感、藥物篩選等研究。
3.免疫分析:結合抗體或抗原,制備免疫親和柱,用于食品安全檢測、疾病診斷等領域。
四、使用方法
使用溴化氫活化凝膠進行生物分子偶聯時,需遵循以下步驟:
1.凝膠預處理:用低pH(pH 2-3)緩沖液洗脫添加劑,保護反應基團活性。
2.配體溶解:將待偶聯的生物分子溶解于耦合緩沖液中(如含0.5M NaCl的0.1M NaHCO₃,pH 8.3)。
3.偶聯反應:將配體溶液與活化凝膠混合,在室溫或4℃下反應1-16小時。
4.洗滌與封閉:用耦合緩沖液洗滌未結合的配體,再用乙醇胺等試劑封閉剩余活性基團。
5.保存:將偶聯后的凝膠保存于4-8℃,避免干燥和凍結。
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